CART细胞的制备是CART治疗的核心技术环节，涉及基因转导、细胞培养、质量检测等多个步骤。制备工艺的优化直接影响CART细胞的产量、质量和临床疗效。目前，病毒载体系统和非病毒载体系统是两种主要的技术路线。
病毒载体转导技术
逆转录病毒和慢病毒是目前最常用的CART细胞基因转导载体。逆转录病毒载体转导效率高，但只能感染分裂期细胞，且存在插入突变风险。慢病毒载体可感染分裂期和非分裂期细胞，整合效率稳定，是目前主流的选择。病毒载体系统转导效率高，CAR表达稳定，但制备成本高，且存在生物安全问题。近年来，研究者致力于开发更安全、更经济的病毒载体系统。
非病毒基因转移技术
为克服病毒载体的局限，非病毒基因转移技术快速发展。转座子系统（如Sleeping Beauty、PiggyBac）通过转座酶将CAR基因整合至基因组，转导效率不断提高，成本显著降低。电穿孔和mRNA转染技术可实现瞬时CAR表达，安全性更高。CRISPR/Cas9基因编辑技术可将CAR基因定点整合至安全港位点，提高表达稳定性。这些非病毒技术正逐步应用于临床。
细胞培养工艺优化
CART细胞的体外培养需要优化培养条件和细胞因子组合。传统的IL-2培养体系可促进T细胞增殖，但可能导致T细胞向终末分化状态发展，影响体内持久性。加入IL-7和IL-15可维持T细胞干细胞样特性，提高长期存活和增殖能力。自动化封闭式培养系统的应用，减少了污染风险，提高了产品一致性和标准化水平。
